Plateforme ZebraSens de phénotypage

Présentation

Responsables scientifiques: Mireille Rossel et Benjamin Delprat

Responsable technique: Jérôme Sarniguet

Comité de pilotage : Anne-Françoise Roux, Mireille Rossel, Laurent Givalois, Tangui Maurice, Benjamin Delprat, Nadine Mestre-Frances, Jérôme Sarniguet

Le plateau ZebraSens a été créée à l’initiative de 2 laboratoires : MMDN (JM Verdier) et LGMR (AF Roux) afin d’analyser au niveau fonctionnel les déficits sensoriels et comportementaux dans les pathologies dégénératives.

Ce plateau regroupe sur le même site et à proximité du plateau d’élevage du Laboratoire MMDN « Ze-Neuro », des équipements de pointe permettant l’analyse de la vision, de l’audition et du comportement locomoteur du poisson zèbre aux stades larvaires jusque chez l’adulte, à savoir :

1 Visiobox®
1 Zebracube®
1 Zebrabox High Speed® (1000 FPS)
2 Zebrabox® (30 FPS)
1 Zebrabox® équipée d'une caméra haute vitesse(140 FPS)
1 Seahorse®

Depuis mars 2022, le plateau Zebrasens fait partie de la plateforme ZEFIX, plateforme technologique spécialisée dans les modèles aquatiques zebrafish et xénopes intégrée à l’UAR Biocampus Montpellier. ZEIX est une structure multi-sites qui regroupe 4 plateaux techniques d’élevage et d’expérimentation sur Montpellier. Son objectif est de fournir les espaces, les équipements, les expertises et les formations nécessaires pour l’hébergement et la mise en œuvre de projets en lien avec les modèles aquatiques Danio rerio (zebrafish) et Xenopus laevis (xenopes).

EQUIPEMENTS DISPONIBLES SUR LE PLATEAU:

- La Visiobox® permet d'évaluer la vision en mesurant la réponse OKR (OptoKinetic Response test). Ce test évalue l’acuité visuelle des poissons zèbre dans un environnement sans stress et de façon automatisée.

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L’acuité visuelle mesurée par OKR implique le mouvement des yeux des poissons. Ce mouvement est généré par le défilement de lignes blanches et noires à intervalles réguliers et fortement contrastées. Il est possible de diminuer la taille, le contraste et la couleur des bandes pour augmenter la difficulté et évaluer avec précision l’acuité visuelle d’un poisson sauvage ou mutant. Il est possible de mesurer l’acuité visuelle de 4 poissons simultanément.

- Le ZebraCube® permet d’étudier l’activité locomotrice tridimentionnelle (XYZ) des poissons adultes. Les poissons sont vidéotraqués et il est ainsi possible de déterminer la distance parcourue, les phases d’arrêt et d’activité des poissons, la position des poissons dans les bacs. En outre, il est possible de mesurer le comportement social (« shoaling ») ainsi que la mémoire spatiale (T-maze et double H-maze) et le mémoire spatiale avec reconnaissance de pattern et stimulus externes (Y-maze).

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- La Zebrabox High Speed® permet de mesurer l’acuité auditive des larves à partir de 5 dpf. Cette box dispose d’un module vibratoire ainsi que d’une caméra haute résolution (1000 images/sec). Ce système est ainsi capable de mesurer la courbure que fait la larve suite à une stimulation sonore de fréquence et d’intensité choisie. Cette courbure est caractéristique du comportement d’évitement d’un prédateur et renseigne sur l’acuité auditive du poisson.

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- Les Zebrabox® sont capables de mesurer l’activité locomotrice des larves à partir de 5dpf (tracking) ainsi que leur mobilité (quantification). Le test VMR (Visual Motor Response) permet de mesurer cette activité locomotrice en réponse à des changements brusques d’intensité lumineuse, isolés ou répétés. Les larves sont vidéotraquées et il est ainsi possible de déterminer la distance parcourue, les phases d’arrêt et d’activité des larves, leur position dans le puits.

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Le test ASR (Acoustic Startle Response) permet de déterminer l’acuité auditive des larves en réponse à un stimulus sonore de fréquence et d’intensité choisie.

NB: une ZEBRABOX équipée avec 1 caméra haute vitesse 140 fps permet de suivre des mouvements rapides tels que des mouvements épileptiques

A noter : La Zebrabox® et le Zebracube® peuvent être utilisés également pour suivre l’activité locomotrice du modèle drosophile.

Le Seahorse XFe24 : permet la mesure du taux de consommation d'oxygène (OCR) des larves vivantes dans un format de plaque de 24 puits. Le taux d'OCR est un indicateur clé de la respiration mitochondriale et de la glycolyse ainsi que du taux de production d'ATP.

Seahorse

Tarifs sur demande : jerome.sarniguet(at)inserm.fr

Remerciements : La plateforme "ZebraSens de phénotypage" a été principalement financée par l’Association SOS Rétinite France, via le concours de la Caisse d’Epargne.